Tesi sperimentale

Nuovi inibitori delle ossidosqualene ciclasi di Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Trypanosoma cruzi, Pneumocystis carinii, Arabidopsis thaliana e Homo sapiens espresse in lievito

27/07/2009

Dipartimento di Scienza e Tecnologia del Farmaco

BACKGROUND
La ciclizzazione dello squalene epossido è la tappa strutturalmente più critica della biosintesi degli steroli: ad un composto terpenico non ciclico a 30 atomi di carbonio, lo squalene epossido, viene imposta la classica struttura steroidica tetraciclina. La reazione, considerata una delle più complesse reazioni monoenzimatiche conosciute, è opera dell’enzima ossidosqualene ciclasi, che agisce senza il coinvolgimento di ioni metallici e/o coenzimi.
Da oltre 50 anni le ossidosqualene ciclasi sono studiate per il loro affascinante meccanismo di azione e per le applicazioni che inibitori di questi enzimi potrebbero avere in medicina e in agricoltura.
Il nostro gruppo di ricerca ha negli anni provato l’attività di decine di composti progettati come inibitori delle ossidosqualene ciclasi, collaborando con gruppi di ricerca italiani e stranieri. E’ in corso in questo periodo la collaborazione con il prof. Franz Bracher dell’Università di Monaco di Baviera, che ci ha proposto una nuova serie di inibitori progettati come analoghi di substrato o di stato di transizione.

PROGETTO
L’effetto di nuovi composti progettati come inibitori delle ossidosqualene ciclasi verrà provato su colture di cellule e omogenati cellulari di ceppi di lievito ricombinanti, esprimenti le ossidosqualene ciclasi di S. cerevisiae, C. albicans, Schizosaccharomyces pombe, Pichia pastoris, Arabidopsis thaliana, Mus musculus, Homo sapiens.
Scopo del progetto è individuare nuove molecole potenzialmente utilizzabili come farmaci, e contribuire alla caratterizzazione delle ossidosqualene ciclasi.

ARTICOLAZIONE DEL PROGETTO
-Incubazioni di cellule di lieviti ricombinanti con acetato radioattivo in presenza di inibitori della ossidosqualene ciclasi.
-Determinazione della distribuzione della radioattività tra i componenti della frazione lipidica mediante radioscansione di piastre cromatografiche.
-Incubazioni di omogenati cellulari di lieviti ricombinanti con ossidosqualene radioattivo in presenza di inibitori della ossidosqualene ciclasi.
-Determinazione della IC50 e di altri parametri idonei a quantificare l’effetto degli inibitori.
-Interpretazione dei risultati attraverso il modelling molecolare (in collaborazione con i Proff. Giulia Caron e Giuseppe Ermondi).

TECNICHE SPERIMENTALI
-Colture cellulari
-Omogeneizzazione e frazionamento subcellulare
-Incubazioni di cellule e omogenati cellulari con molecole marcate
-Tecniche dei determinazione della radioattività (radioscansione, scintillazione liquida)

0116707698