Biochimica applicata - Farmacia
AA 2008/2009
Scheda del corso
Mutuato da
Corso integrato
Moduli
Obiettivi e risultati
descrizione delle principali metodologie adottate nei laboratori di biochimica, biochimica clinica e biologia molecolare e nozioni di base sul trasferimento dell'informazione genetica dal DNA alle proteine. Requisiti: conoscenze di base di chimica organica.
Modalità d'esame: prova orale.
Contenuti
Programma
BIOCHIMICA APPLICATA Crediti 5 - Codice F 3150
Principi basilari di biologia molecolare.Struttura del DNA: DNA A, B, Z, H. DNA circolari e superavvolti. Cenni di topologia. Replicazione del DNA nei procarioti e negli eucarioti. Telomeri e telomerasi. Retrotrascrizione con trascrittasi inversa. Il trasferimento dell'informazione genica: Sintesi e maturazione degli RNA messaggeri e ribosomiali nei procarioti e negli eucarioti ( modificazioni delle estremità 3' e 5' dopo la trascrizione, splicing, splicing alternativo, fattori di trascrizione e regolazione). SiRNA ( argomento svolto solo nell’A.A 2008-09).Codice genetico, RNA di trasporto, aminoacil-tRNA sintetasi e biosintesi delle proteine.
Tecnologia del DNA ricombinante.
Enzimi di restrizione, ricombinazione in vettori plasmidici, clonazione di geni, trascrittasi inversa e cDNA, librerie genomiche.
La biologia molecolare nella diagnostica biochimico-clinica.
Sonde molecolari, Southern Blot e diagnostica molecolare, analisi dei polimorfismi della lunghezza dei frammenti di restrizione (DNA fingerprinting) diagnostica mediante reazione polimerasica a catena (PCR), sequenziamento del DNA.
Elettroforesi di acidi nucleici e proteine.
Principi generali ed esempi di applicazioni : elettroforesi in agarosio degli acidi nucleici; elettroforesi SDS-PAGE; separazione elettroforetica, composizione e funzione delle frazioni sieroproteiche. Isoelettrofocalizzazione ed elettroforesi bidimensionale.
Metodi cromatografici applicati alla purificazione di proteine.
Gel cromatografia e cromatografia di scambio ionico e di affinità.
Applicazioni spettrofotometriche.
Principi generali, definizione di trasmittanza ed assorbanza, legge di lambert-Beer.
Spettri di assorbimento nell’UV di DNA e proteine, di coenzimi come il NAD e di emoproteine.
Dosamento di DNA e proteine totali.
Generalità riguardanti la determinazione delle attività enzimatiche. Valutazione quantitativa dell’attività enzimatica: unità di misura, attività specifica, velocità di una reazione enzimatica e considerazioni sulle condizioni otttimali di misura: determinazione dell'attività enzimatica con metodi spettrofotometrici con esempi ( citocromo c reduttasi, malico deidrogenasi, maltasi, transaminasi e metodo della reazione accoppiata). Utilizzo di enzimi per la determinazione quantitativa di metaboliti (glucoso, colesterolo).
Tecniche immunologiche.
Principi generali. Reazione antigene-anticorpo. Sistemi di dosaggio immunologico basati sulla marcatuta di antigeni od anticorpi con isotopi radioattivi (RIA), enzimi (ELISA), sostanze fluorescenti (FIA).
Western blot, Southern blot, Northern blot